全長cDNA文庫構建

我們提供高全長比例的文庫構建服務,全長比例可以高達85%以上。

  • 產品詳情

一、普通全長cDNA文庫構建

1. 服務流程

1.1  客戶樣品QC,Total RNA的提取。
1.2  mRNA的分離。
1.3  采用CAP Trapper法進行全長mRNA的富集。
1.4  以mRNA為模板進行cDNA雙鏈的合成。
1.5  對合成的cDNA雙鏈進行分級純化。
1.6  將分級純化的cDNA與載體進行all-direct重組反應。
1.7  將重組產物轉化DH10B感受態細胞。
1.8  cDNA文庫的QC。
   a)  檢測文庫庫容量。
   b) 每個文庫隨機挑取32個克隆子,PCR檢測檢測平均插入片段大小,陽性率。
   c)  隨機挑取24個克隆進行正向測序,通過NCBI的BLSTAX分析全長率。

2.送樣要求

   2.1  針對每個文庫,客戶需提供至少能提取500ug總RNA的樣本,或者至少500ug的總RNA。

3.發貨內容

   3.1  我們提供構建好的cDNA文庫的甘油菌液(含20%甘油的LB培養基),隨機克隆子的PCR鑒定圖譜,24個克隆正向測序報告,文庫構建報告。

4.質量標準

   4.1  文庫庫容量:大于1*10^6 CFU。
   4.2  平均插入片段:大于1.2Kbp。
   4.3   陽性率:大于95%。
   4.4   全長率:大于65%。
   4.5   我們構建的文庫相對于市場上的其他文庫構建方法具有以下優勢:
     1)我們從mRNA為模板直接進行cDNA雙鏈的合成,沒有經過任何擴增的過程,保證了文庫的質量和忠實性。
     2)使用了目前市場上高質量的反轉錄酶(Superscrip III),保證文庫的片段長度。
     3)使用重組的方法,不經過任何的酶切過程,不用擔心cDNA被切斷而影響文庫質量,重組效率較酶切連接高很多,可以大大提高原始文庫的庫容量。

5.服務時間

25個工作日內
 
二、高全長比例全長cDNA文庫構建

1. 服務流程

1.1  客戶樣品QC,Total RNA的提取。
1.2  mRNA的分離。
1.3  使用特殊的抗體進行全長mRNA的富集。
1.4  以mRNA為模板進行cDNA雙鏈的合成。
1.5  對合成的cDNA雙鏈進行分級純化。
1.6  將分級純化的cDNA與載體進行all-direct重組反應。
1.7  將重組產物轉化DH10B感受態細胞。
1.8  cDNA文庫的QC。
   a) 檢測文庫庫容量。
   b) 每個文庫隨機挑取32個克隆子,PCR檢測檢測平均插入片段大小,陽性率。
   c) 隨機挑取24個克隆進行正向測序,通過NCBI的BLSTAX分析全長率。

2.送樣要求

   2.1  針對每個文庫,客戶需提供至少能提取500ug總RNA的樣本,或者至少500ug的總RNA。

3.發貨內容

   3.1  我們提供構建好的cDNA文庫的甘油菌液(含20%甘油的LB培養基),隨機克隆子的PCR鑒定圖譜,24個克隆正向測序報告,文庫構建報告。

4.質量標準

   4.1  文庫庫容量:大于1*10^6 CFU。
   4.2  平均插入片段:大于1.2Kbp。
   4.3  陽性率:大于95%。
   4.4  全長率:大于85%。
   4.5  我們構建的文庫相對于市場上的其他文庫構建方法具有以下優勢:
     1)我們從mRNA為模板直接進行cDNA雙鏈的合成,沒有經過任何擴增的過程,保證了文庫的質量和忠實性。
     2)使用了目前市場上高質量的反轉錄酶(Superscrip III),保證文庫的片段長度。
     3)使用重組的方法,不經過任何的酶切過程,不用擔心cDNA被切斷而影響文庫質量,重組效率較酶切連接高很多,可以大大提高原始文庫的庫容量。

5.服務時間

35個工作日內

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