SILAC服務

產品簡述

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SILAC服務

產品定義

細胞培養氨基酸穩定同位素標記(Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture, SILAC),這種方法首先是由2002年丹麥Mann實驗室的Ong等對AACT技術作了進一步改進而獲得,并首次應用于定量蛋白質組學研究,為全面、系統地定性和定量分析復雜哺乳動物細胞蛋白質組提供了有效的解決方案。

技術原理

分別用天然同位素(輕型)或穩定同位素(重型)標記的必需氨基酸取代細胞培養基中相應氨基酸,細胞經5-6代倍增周期后,穩定同位素標記的氨基酸完全摻入到細胞新合成的蛋白質中替代了原有氨基酸。不同標記細胞的裂解蛋白質按細胞數或蛋白量等比例混合,經分離、純化后進行質譜鑒定。


實驗流程

注釋:“SDS-PAGE分級”處也可選擇酶解后在肽段水平進行分級。

使用儀器

Thermo Scientific Q Exactive

技術優勢

細胞培養時摻入標記,減小實驗誤差,定量更準確。

應用領域

疾病標志物篩選              作用機制研究

藥物作用靶點研究           特殊功能蛋白質篩選

樣品要求

樣品類型

樣品要求(/組樣品)

蛋白質提取物

濃度>1μg/μl,蛋白質總量 >300μg

細胞樣品

細胞量>107

技術參考案例

[1]       Kim JY, Welsh EA, et al. Dissection of TBK1 signaling via phosphoproteomics in lung cancer cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 2013; 110(30): 12414-9.

[2]       Sobczyk GJ, Wang J, et al. SILAC-based proteomic quantification of chemoattractant-induced cytoskeleton dynamics on a second to minute timescale. Nature Commun. 2014; 5: 3319.

[3]       Ravikumar V, Shi L, et al. Quantitative phosphoproteome analysis of Bacillus subtilis reveals novel substrates of the kinase PrkC and phosphatase PrpC. Mol Cell Proteomics. 2014 Jan 5.

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